Electroforeza

Solutiile tampon utilizate la electroforeza trebuie sa prezinte un pH corespunzator unei migrari a ionilor. pH - ul solutiei tampon joaca un rol important in determinarea mobilitatii ionilor in special atunci cand se urmareste separarea electroforetica a amfionilor. Electroforeza trebuie sa se execute la un pH diferit de pH-ul izoelectric al aminoacizilor si proteinelor ce urmeaza a fi separate. Electroforeza se efectueaza in sisteme in care ionii ce urmeaza a fi separate sunt asezati pe suporturi solide si inerte cum ar fi : hartia, agar amidon, poliacrilamina. Ionii separate raman in zone distinct pe mediul support si pot fi usor localizati prin metode biochimice.

In electroforeza pe hartie Solutia de analizat este aplicata pe o banda de hartie de filtru umectata cu solutie tampon cu pH potrivit iar capetele benzilor sunt conectate prin intermediul solutiei tampon la sursa de current electric continuu. Particulele depuse pe hartie se vor deplasa in camp electric potrivit sarcinii electrice. Dupa uscarea si tratarea electroforegramei locurile pana unde au migrat substantele supuse actiunii curentului electric apar sub forma de benzi colorate. Dupa pozitia benzilor in raport cu linia de start se poate face identificarea componentelor suprinse in amestecul de analizat.

Principiul metodei de dozare se bazeaza pe reactia biuretului. Proteinele sin ser reactioneaza cu sarurile de cupru in mediul alcalin formand un compus de culoare albastru-violet cu densitatea direct proportional cu concentratia proteinelor din proba.
Mod de lucru In 2 eprubete se pipeteaza ser 0,1 in proba, ser fiziologic- 0,1 in blanc si reactive biuret cate 5 ml in fiecare eprubeta. Se omogenizeaza si se lasa 30 de minute la temperature camerei, se masoara extintia probei fata de blanc la 546 nm.